詳解維多珠ELISA試劑盒的操作流程、樣本要求與結果判讀標準

更新時間：2026-02-09

技術文章

　　維多珠ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法原理，專門用于檢測血清中維多珠單抗濃度，是炎癥性腸病治療藥物監測的重要工具。該技術具有高特異性、高靈敏度等特點，廣泛應用于臨床實驗室。

　　樣本要求與預處理規范

　　維多珠ELISA檢測主要適用于血清樣本。全血采集后需室溫靜置30分鐘，4℃離心2000×g 10分鐘，取上清即為血清。樣本應避免溶血，反復凍融不超過3次。短期保存可置于4℃冷藏(≤24小時)，長期保存需-80℃分裝凍存，運輸時使用干冰或冷鏈箱(2-8℃)，避免劇烈震蕩。對于高脂血或溶血樣本，需進行超速離心或過濾處理，以消除基質效應干擾。樣本稀釋需使用試劑盒指定的稀釋液(通常為PBS+1%BSA)，按說明書要求進行梯度稀釋，確保檢測濃度落在標準曲線范圍內。

　　標準曲線繪制與質量控制

　　實驗前需繪制標準曲線。用稀釋液將標準品溶解至1000pg/mL，然后進行倍比稀釋，通常設置6-8個濃度點(如1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、0 pg/mL)。將不同濃度標準品加入酶標板孔中，每個濃度設2-3個復孔。同時設置空白對照孔(只加稀釋液)、陰性對照孔和陽性對照孔。標準品不得重復使用，未用完部分需-20℃分裝保存，避免反復凍融。每板實驗必須包含質控樣本，確保標準曲線R²≥0.99，板內變異系數(CV)控制在合理范圍內，保證實驗結果的準確性和可重復性。

　　操作流程詳解

　　實驗開始前，將所有試劑從冰箱取出，室溫平衡20分鐘，確保溫度一致。按照說明書配制洗滌液、酶標抗體、底物等工作液。向酶標板孔中加入包被抗體或抗原，4℃過夜或37℃孵育1-2小時，使固相包被。棄去液體后，每孔加入200-300μL洗滌液，靜置1-2分鐘后棄去，重復洗滌3-5次，拍干殘留液體。加入封閉液，37℃孵育1-2小時，封閉未結合位點，再次洗滌3-5次。加入稀釋后的樣本和標準品，37℃孵育1-2小時，使抗原抗體特異性結合。洗滌后加入酶標抗體，37℃孵育1-2小時，再次洗滌5-6次。加入底物溶液，37℃避光孵育15-30分鐘顯色，當標準曲線出現明顯藍色梯度時，加入終止液終止反應，溶液由藍色變為黃色。立即用酶標儀在450nm或492nm波長下讀取各孔吸光度值(OD值)。

　　結果判讀標準與臨床意義

　　根據標準品的濃度和對應OD值繪制標準曲線，采用四參數或雙對數曲線擬合，計算樣本中維多珠單抗濃度。結果判讀需結合臨床背景：治療藥物監測(TDM)的目標濃度范圍通常為5-10μg/mL，低于此范圍可能提示藥物暴露不足，需調整劑量；高于此范圍可能增加不良反應風險，需減量或調整給藥間隔。同時需考慮抗藥抗體(ADA)的干擾，ADA陽性可能導致假陰性或假陽性結果，必要時需檢測ADA水平進行綜合判斷。實驗結果的報告應包括樣本類型、檢測項目、檢測結果、參考范圍、試劑盒名稱和批號等信息，確保結果的可追溯性和臨床應用的可靠性。

　　維多珠ELISA試劑盒的操作流程標準化、樣本處理規范化和結果判讀標準化，為炎癥性腸病患者的個體化治療提供了重要的實驗室依據，是實現精準醫療的重要工具。

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