在ELISA試劑盒的操作過程中，我們除了需要多點細心之外，還有一些需要重點注意的地方，下面我們來仔細說說。
 

　　方面一：檢驗技師
 

　　應具備從事實驗室操作的基本素質和實踐經驗。能熟練操作實驗儀器、器械，具有一定總結和分析問題的能力，對實驗中出現的意外情況能及時妥善解決。
 

　　方面二
 

　　使用校對過的微量移液器，排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要。
 

　　方面三：仔細閱讀說明書
 

　　嚴格按照說明書要求進行規范化操作。ELISA試劑盒不同批號的試劑不可混用。值得改進的地方，反復試驗確定成立后才能改進。
 

　　方面四：洗滌*
 

　　洗板不*，酶結合物本底顯色會呈現假陽性。洗滌液要新鮮，現用現配，陳舊的洗滌液會出現本底增高現象，也可能出現假陽性。
 

　　方面五：嚴控反應時間
 

　　反應時間過長，酶失活；反應時間過短，酶結合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結合，生成物結構松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。
 

　　方面六
 

　　注意ELISA試劑盒保存期，過保存期的試劑不能使用。
 

　　方面七：評估試劑的實用性
 

　　試劑的穩定與否，對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應進行陰、陽對照及樣品反復比照試驗，判定試劑符合要求后方可使用。
 

　　方面八：嚴格掌握顯色時間
 

　　顯色時間過短，加入終止液反應終止后，底物結合物的量過少，易出現假陰性。超過顯色要求時間后顯色，應判為假陽性，這可能與試劑本身有關。加顯色劑后立即顯色，不可報陽性，這可能是本底顯色的結果。
 

　　方面九：加樣要準確、快速
 

　　如果加樣不準確，酶生成物的量不能確定，ELISA試劑盒直接影響顯色結果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關，所以加樣應慎重。要求在一定時間內加樣完畢的實驗，如果加樣遲緩，便出現誤差，而且試劑長時間暴露在外，尤其室溫過高時，保存期會縮短甚至失效。